梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条及其制备方法,涉及梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂。设2条试剂条,第1条设载体板、加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜、梅毒特异性IgG抗体检测线、对照线和吸收垫;第2条设载体板、加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜、特异性总抗体检测线、对照线和吸收垫。制备梅毒重组抗原TPN17、TPN47;硝酸纤维素膜的点样;制备胶体金;胶体金与TPN17、TPN47的标记;制备免疫层析检测条。可用于全血、血清、血浆及脑脊液等标本中梅毒特异性IgG抗体和特异性总抗体的检测,标本用量微小,不需特殊仪器,肉眼直接判读结果。检测简便快速,特异性强,灵敏度高,准确可靠。
1.梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条,其特征在于设有第1试剂条和第2试剂条;第1试剂条设有第1载体板、第1加样垫、第1胶体金垫、第1硝酸纤维膜、梅毒特异性IgG抗体检测线、第1对照线和第1吸收垫;第1加样垫、第1胶体金垫、第1硝酸纤维膜和第1吸收垫依次粘贴在第1载体板上表面,第1加样垫的一端设在第1胶体金垫的一端上,第1胶体金垫的另一端设在第1硝酸纤维膜的一端上,第1吸收垫的一端设在第1硝酸纤维膜的另一端上,梅毒特异性IgG抗体检测线和第1对照线依次设在第1硝酸纤维膜上;在梅毒特异性IgG抗体检测线处包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体,在第1对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体;第2试剂条设有第2载体板、第2加样垫、第2胶体金垫、第2硝酸纤维膜、特异性总抗体检测线、第2对照线和第2吸收垫;第2加样垫、第2胶体金垫、第2硝酸纤维膜和第2吸收垫依次粘贴在第2载体板上表面,第2加样垫的一端设在第2胶体金垫的一端上,第2胶体金垫的另一端设在第2硝酸纤维膜的一端上,第2吸收垫的一端设在第2硝酸纤维膜的另一端上,特异性总抗体检测线和第2对照线依次设在第2硝酸纤维膜上;在特异性总抗体检测线处包被抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17或梅毒特异性抗原TPN47,在第2对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体;所述梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条由以下方法制备:1)制备梅毒重组抗原TPN17、TPN47采用基因克隆技术,PCR扩增编码梅毒螺旋体抗原的DNA,并插入大肠杆菌中使其表达,得梅毒重组抗原TPN17和TPN47;2)硝酸纤维素膜的点样在梅毒特异性IgG抗体检测线上包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体,在特异性总抗体检测线处包被抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17或梅毒特异性抗原TPN47,晾干;所述抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17或梅毒特异性抗原TPN47的浓度为1~4mg/mL;抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体的浓度为1~4mg/mL;羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47IgG抗体由抗TPN17-IgG抗体与抗TPN47-IgG抗体按体积比1∶1混合,其终浓度为1~4mg/mL;三者点样量为1μL/cm;3)制备胶体金采用柠檬酸三钠还原方法制备25nm胶体金,取1%氯金酸1mL加入到100mL去离子双蒸水中,得到的氯金酸浓度为0.01%,置于带冷凝装置的烧瓶中加热至沸腾,磁力加热搅拌下加入1%柠檬酸三钠水溶液2.0mL,继续加热直至溶液呈葡萄酒色为止,冷却后置于棕色瓶中4°C冰箱保存备用;4)胶体金与TPN17、TPN47的标记胶体金与梅毒特异性抗原TPN17的标记:取胶体金10mL,用0.1mol/Lxa0NaOH调至pH5.4,加100μgxa0TPN17,混匀,放置5min,加入5%BSA1mL混匀,4°C、10000r/min离心1h,弃上清,将沉淀用TBS缓冲液溶解至10mL,4°C、10xa0000r/min离心1h,弃上清,沉淀用TBS稀释至1mL,得胶体金标记的TPN17抗原;胶体金与梅毒特异性抗原TPN47的标记同上操作,得胶体金标记的TPN47抗原;将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混合后,涂于玻璃纤维膜上,烘干,制备成胶体金垫;所述将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混合,是胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原以体积比1∶0.2~5混合;5)制备免疫层析检测条将第1加样垫、第1胶体金垫、第1硝酸纤维膜和第1吸收垫依次粘贴在第1载体板上表面,第1加样垫的一端设在第1胶体金垫的一端上,第1胶体金垫的另一端设在第1硝酸纤维膜的一端上,第1吸收垫的一端设在第1硝酸纤维膜的另一端上,梅毒特异性IgG抗体检测线和第1对照线依次设在第1硝酸纤维膜上;在梅毒特异性IgG抗体检测线处包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体,在第1对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体,用切条机切成条状,得梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条的第1试剂条;将第2加样垫、第2胶体金垫、第2硝酸纤维膜和第2吸收垫依次粘贴在第2载体板上表面,第2加样垫的一端设在第2胶体金垫的一端上,第2胶体金垫的另一端设在第2硝酸纤维膜的一端上,第2吸收垫的一端设在第2硝酸纤维膜的另一端上,特异性总抗体检测线和第2对照线依次设在第2硝酸纤维膜上;在特异性总抗体检测线处包被抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17或梅毒特异性抗原TPN47,在第2对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体,用切条机切成条状,得梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条的第2试剂条。
2.如权利要求1所述的梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条,其特征在于第1试剂条的第1加样垫与第2试剂条的第2加样垫之间用连接膜连接。
3.如权利要求1所述的梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条,其特征在于在步骤3)中,所述柠檬酸三钠的浓度为2%。
4.如权利要求1所述的梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条,其特征在于在步骤4)中,所述烘干的温度为37°C。技术领域
本发明涉及一种梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂,尤其是涉及一种采用胶体金免疫层析技术(immunochromatography)进行的梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条及其制备方法。
背景技术
梅毒(Syphilis)是一种由梅毒螺旋体(Treponemaxa0pallidum,TP)引起的性传播性疾病,其病原体是梅毒螺旋体,属螺旋体科。梅毒螺旋体主要通过性接触、输血、创口或者胎盘等途径传播。梅毒螺旋体从感染区附近的淋巴结进入血液,播散全身,使机体几乎所有的组织及器官受累,临床表现为全身性,可分为不同临床阶段,包括一期、二期、三期和潜伏期。世界卫生组织(WHO)曾乐观地预言:“由于有高敏度检测方法和高效的治疗方案,梅毒是一种能够通过公共卫生措施得到成功控制的性传播性疾病”。遗憾的是,至今梅毒依然是世界范围的公共卫生问题,缺乏有效的行政控制措施,每年全球大约有1200万的患者,其中60万孕妇患者。(参见:Healthxa0Protectionxa0Agencyxa0Centrexa0forxa0Infections.Internationalxa0Encyclopediaofxa0Publicxa0Health-Syphilis[M].London,UK:Healthxa0Protectionxa0Agencyxa0Centre,2008,289-297)事实上,梅毒的感染现状可能要比想象中的更让人悲观。调查发现,梅毒感染者已经较广泛地存在于普通人群中。梅毒螺旋体尚不能进行体外培养,梅毒诊断与流行病学调查主要依赖于血清学试验,包括特异性抗体和反应素检测两大类型。梅毒特异性抗体IgM(TP-IgM)和IgG(TP-IgG)抗体分别于2周和4周后产生,即使患者经过足够治疗,其仍能长期存在,甚至终身不消失(参见:Luisxa0Jxa0F,Felipexa0Uxa0S,Santaxa0Gxa0C,etxa0al.evaluationxa0ofxa0axa0rapidxa0stripxa0andxa0axa0particlexa0agglutinationtestsxa0forxa0syphilisxa0diagnosis[J].Diagnosticxa0Microbiologyxa0andxa0Infectiousxa0Disease,2007,59:123-126);而另一种抗体物质反应素产生较晚,一般在受感染后5~7周产生(参见:林月圆.TPPA和TRUST在梅毒诊断中的价值与临床相关问题[J].放射免疫学杂志,2009,22(3):295-297.),而且晚期梅毒、梅毒治疗后期以及潜伏梅毒可能阴性。因此梅毒特异性抗体的阳性率、敏感性显著高于反应素。TP-IgM是梅毒感染后,机体最先出现的特异性抗体。只要有活的梅毒螺旋体存在,其TP-IgM将会维持在一定的水平。Martinaxa0H等(参见:Martinaxa0H,Daanxa0Wxa0N,Martxa0M,etxa0al.Comparisonxa0ofxa0axa0Treponemaxa0pallidumxa0IgMxa0immunoblotxa0withxa0axa019Sxa0fluorescenttreponemalxa0antibodyxa0absorptionxa0testxa0forxa0thexa0diagnosisxa0ofxa0congenitalxa0syphilis[J].DiagnosticMicrobiologyxa0andxa0Infectiousxa0Disease,2007,59:61-66.)认为TP-IgM是梅毒早期感染并活动的一项血清学标志,李步荣等(参见:李步荣,贺军涛,张毅,等.梅毒螺旋体IgM抗体检测的临床意义[J].第四军医大学学报,2007,28(16):1495-1497)认为TP-IgM与TP-DNA一样,代表着梅毒传染性指标。在排除近期抗梅毒治疗的前提下,TP-IgM若不转阴,提示体内可能残存梅毒螺旋体或治疗不彻底。TP-IgM阴转者随访时再转阳性,表明再次感染梅毒(参见:Rawstronxa0SA,Mehtaxa0S,Brombergxa0K,etxa0al.evaluationxa0ofxa0axa0Treponemaxa0pallidum2specificxa0IgMenzymexa0immunoassayxa0andxa0Treponemaxa0pallidumxa0westernxa0blotxa0antibodyxa0detectionxa0inxa0thexa0diagnosisofmaternalxa0andxa0congenitalxa0syphilis[J].Sexxa0Transmxa0Dis,2004,31(2):123-126)。尽管TP-IgM阴性不能完全排除传染性,但TP-IgM阳性必定提示该患者具有传染性。早期的血清学方法使用完整梅毒螺旋体作为抗原,研究和诊断用的TP是以TP感染兔睾丸获得,这种方法花费大、获得的TP量少、不纯(混有宿主蛋白),与其他病原体存在交叉反应,因此假阳性也时有发生。随着分子生物学技术的普及及梅毒螺旋体抗原的相继克隆,将重组抗原应用于梅毒实验已经越来越多。目前研究比较多的TP抗原有TPN17、TPN47、TPN15、TPN44.5、TPN36、TP0453、TP0684及TPr家族。采用重组DNA技术制备的重组抗原可以克服完整TP抗原的缺点,能快速、经济地制备无限量特异重组TP抗原。梅毒特异性抗体检测是梅毒确证试验,包括TPHA,TPPA,ELISA,FTA-ABS及Western-blot等,其特异性均较高。然而,面对严峻的防制形式,不但需要特异准确的检测手段,还需要一种更简便快捷的试剂来筛查,以便为临床和疾病防控提供对策。
发明内容
本发明的目的是提供一种梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条及其制备方法。本发明所述梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条设有第1试剂条和第2试剂条;第1试剂条设有第1载体板、第1加样垫、第1胶体金垫、第1硝酸纤维膜(NC膜)、梅毒特异性IgG抗体检测线、第1对照线和第1吸收垫;第1加样垫、第1胶体金垫、第1硝酸纤维膜和第1吸收垫依次粘贴在第1载体板上表面,第1加样垫的一端设在第1胶体金垫的一端上,第1胶体金垫的另一端设在第1硝酸纤维膜的一端上,第1吸收垫的一端设在第1硝酸纤维膜的另一端上,梅毒特异性IgG抗体检测线和第1对照线依次设在第1硝酸纤维膜上;在梅毒特异性IgG抗体检测线处包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体,在第1对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体。第2试剂条设有第2载体板、第2加样垫、第2胶体金垫、第2硝酸纤维膜(NC膜)、特异性总抗体检测线、第2对照线和第2吸收垫;第2加样垫、第2胶体金垫、第2硝酸纤维膜和第2吸收垫依次粘贴在第2载体板上表面,第2加样垫的一端设在第2胶体金垫的一端上,第2胶体金垫的另一端设在第2硝酸纤维膜的一端上,第2吸收垫的一端设在第2硝酸纤维膜的另一端上,特异性总抗体检测线和第2对照线依次设在第2硝酸纤维膜上;在特异性总抗体检测线处包被抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17和/或梅毒特异性抗原TPN47,在第2对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体。第1试剂条的第1加样垫与第2试剂条的第2加样垫之间可用连接膜(连接膜可采用玻璃纤维膜)连接,再放入试剂盒中(称单孔加样),也可不经连接膜连接或搭桥(称双孔加样)。所述第1载体板和第2载体板可采用PVC板。所述梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条的制备方法,包括以下步骤:1)制备梅毒重组抗原TPN17、TPN47采用基因克隆技术,PCR扩增编码梅毒螺旋体抗原的DNA,并插入大肠杆菌中使其表达,得梅毒重组抗原TPN17和TPN47;2)硝酸纤维素膜的点样在梅毒特异性IgG抗体检测线上包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体,在特异性总抗体检测线处包被抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17和/或梅毒特异性抗原TPN47,晾干;3)制备胶体金采用柠檬酸三钠还原方法制备25nm胶体金,取1%氯金酸1mL加入到100mL去离子双蒸水中,得到的氯金酸浓度为0.01%,置于带冷凝装置的烧瓶中加热至沸腾,磁力加热搅拌下加入1%柠檬酸三钠水溶液2.0mL,继续加热直至溶液呈葡萄酒色为止,冷却后置于棕色瓶中4°C冰箱保存备用;4)胶体金与TPN17、TPN47的标记胶体金与梅毒特异性抗原TPN17的标记:取胶体金10mxa0L,用0.1mol/Lxa0NaOH调至pH5.4,加100μgxa0TPN17,混匀,放置5min,加入5%BSAxa01mxa0L混匀,4°C、10000r/min离心1h,弃上清,将沉淀用TBS缓冲液溶解至10mxa0L,4°C、10000r/min离心1h,弃上清,沉淀用TBS稀释至1mL,得胶体金标记的TPN17抗原;胶体金与梅毒特异性抗原TPN47的标记同上操作,得胶体金标记的TPN47抗原;将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混合后,均匀地涂于玻璃纤维膜上,烘干,制备成胶体金垫;5)制备免疫层析检测条将第1加样垫、第1胶体金垫、第1硝酸纤维膜和第1吸收垫依次粘贴在第1载体板上表面,第1加样垫的一端设在第1胶体金垫的一端上,第1胶体金垫的另一端设在第1硝酸纤维膜的一端上,第1吸收垫的一端设在第1硝酸纤维膜的另一端上,梅毒特异性IgG抗体检测线和第1对照线依次设在第1硝酸纤维膜上;在梅毒特异性IgG抗体检测线处包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体,在第1对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体,用切条机切成条状,得梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条的第1试剂条;将第2加样垫、第2胶体金垫、第2硝酸纤维膜和第2吸收垫依次粘贴在第2载体板上表面,第2加样垫的一端设在第2胶体金垫的一端上,第2胶体金垫的另一端设在第2硝酸纤维膜的一端上,第2吸收垫的一端设在第2硝酸纤维膜的另一端上,特异性总抗体检测线和第2对照线依次设在第2硝酸纤维膜上;在特异性总抗体检测线处包被抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17和/或梅毒特异性抗原TPN47,在第2对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体,用切条机切成条状,得梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条的第2试剂条。在步骤2)中,所述抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17和/或梅毒特异性抗原TPN47的浓度可为1~4mg/mL,抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体的浓度可为1~4mg/mL,羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47xa0xa0IgG抗体由抗TPN17-IgG抗体与抗TPN47-IgG抗体按体积比1∶1混合,其终浓度为1~4mg/mL;三者点样量为1μL/cm。在步骤3)中,所述柠檬酸三钠的浓度可为2%。在步骤4)中,所述将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混合,最好胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原以体积比1∶(0.2~5)混合;所述烘干的温度可为37°C。本发明提供了一种采用胶体金免疫层析技术建立梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合快速检测试剂条,可用于全血、血清、血浆及脑脊液等标本中梅毒特异性IgG抗体和特异性总抗体的检测。检测时所需的标本量极小,不需要特殊仪器,肉眼直接判读结果,且检测简便快速,特异性强,灵敏度高,准确可靠,成本低,应用广泛。
附图说明
图1为本发明所述梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条实施例的结构组成示意图;A为第1试剂条,B为第2试剂条,1为连接膜。图2为本发明所述梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条实施例的组装示意图。在图2中,(1)为单孔加样组装图,(2)为双孔加样组装图;A为第1试剂条,B为第2试剂条。图3为实验结果模式示意图。在图3中,(1)为使用前的示意图,(2)~(4)为无效试验(产品质量问题),(5)为梅毒特异性总抗体,IgG抗体阳性,(6)为梅毒特异性总抗体阳性,IgG抗体阴性;A为第1试剂条,B为第2试剂条。
具体实施方式
以下实施例将结合附图对本发明作进一步的说明。参见图1和2,本发明所述梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条设有第1试剂条A和第2试剂条B;第1试剂条A设有第1载体板A1、第1加样垫A2、第1胶体金垫A3、第1硝酸纤维膜(NC膜)A4、梅毒特异性IgG抗体检测线A5、第1对照线A7和第1吸收垫A8;第1加样垫A2、第1胶体金垫A3、第1硝酸纤维膜A4和第1吸收垫A8依次粘贴在第1载体板A1上表面,第1加样垫A2的一端设在第1胶体金垫A3的一端上,第1胶体金垫A3的另一端设在第1硝酸纤维膜A4的一端上,第1吸收垫A8的一端设在第1硝酸纤维膜A4的另一端上,梅毒特异性IgG抗体检测线A5和第1对照线A7依次设在第1硝酸纤维膜A4上;在梅毒特异性IgG抗体检测线A5处包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体,在第1对照线A7处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体。第2试剂条B设有第2载体板B1、第2加样垫B2、第2胶体金垫B3、第2硝酸纤维膜(NC膜)B4、特异性总抗体检测线B5、第2对照线B7和第2吸收垫B8;第2加样垫B2、第2胶体金垫B3、第2硝酸纤维膜B4和第2吸收垫B8依次粘贴在第2载体板B1上表面,第2加样垫B2的一端设在第2胶体金垫B3的一端上,第2胶体金垫B3的另一端设在第2硝酸纤维膜B4的一端上,第2吸收垫B8的一端设在第2硝酸纤维膜B4的另一端上,特异性总抗体检测线B5和第2对照线B7依次设在第2硝酸纤维膜B4上;在特异性总抗体检测线B5处包被抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17和/或梅毒特异性抗原TPN47,在第2对照线B7处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体。所述第1载体板A1和第2载体板B1可采用PVC板。所述梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条的制备方法,包括以下步骤:1)制备梅毒重组抗原TPN17、TPN47:采用基因克隆技术,PCR扩增编码梅毒螺旋体抗原的DNA,并插入大肠杆菌中使其表达,得梅毒重组抗原TPN17和TPN47。2)硝酸纤维素膜的点样:在梅毒特异性IgG抗体检测线上包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体,在特异性总抗体检测线处包被抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17和/或梅毒特异性抗原TPN47,晾干,所述抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17和/或梅毒特异性抗原TPN47的浓可为1~4mg/mL,抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体的浓度可为1~4mg/mL,羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47xa0xa0IgG抗体由抗TPN17-IgG抗体与抗TPN47-IgG抗体按体积比1∶1混合,其终浓度为1~4mg/mL;三者点样量为1μL/cm。3)制备胶体金:采用柠檬酸三钠还原方法制备25nm胶体金,取1%氯金酸1mL加入到100mL去离子双蒸水中,得到的氯金酸浓度为0.01%,置于带冷凝装置的烧瓶中加热至沸腾,磁力加热搅拌下加入1%柠檬酸三钠水溶液2.0mL,继续加热直至溶液呈葡萄酒色为止,冷却后置于棕色瓶中4°C冰箱保存备用,所述柠檬酸三钠的浓度可为2%。4)胶体金与TPN17、TPN47的标记:胶体金与梅毒特异性抗原TPN17的标记:取胶体金10mxa0L,用0.1mol/Lxa0NaOH调至pH5.4,加100μgxa0TPN17,混匀,放置5min,加入5%BSAxa01mxa0L混匀,4°C、10000r/min离心1h,弃上清,将沉淀用TBS缓冲液溶解至10mxa0L,4°C、10000r/min离心1h,弃上清,沉淀用TBS稀释至1mL,得胶体金标记的TPN17抗原。胶体金与梅毒特异性抗原TPN47的标记同上操作,得胶体金标记的TPN47抗原,将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混合后,均匀地涂于玻璃纤维膜上,烘干,制备成胶体金垫。所述将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混合,最好胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原以体积比1∶(0.2~5)混合;所述烘干的温度可为37°C。5)制备免疫层析检测条:将第1加样垫、第1胶体金垫、第1硝酸纤维膜和第1吸收垫依次粘贴在第1载体板上表面,第1加样垫的一端设在第1胶体金垫的一端上,第1胶体金垫的另一端设在第1硝酸纤维膜的一端上,第1吸收垫的一端设在第1硝酸纤维膜的另一端上,梅毒特异性IgG抗体检测线和第1对照线依次设在第1硝酸纤维膜上;在梅毒特异性IgG抗体检测线处包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体,在第1对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体,用切条机切成条状,得梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条的第1试剂条;将第2加样垫、第2胶体金垫、第2硝酸纤维膜和第2吸收垫依次粘贴在第2载体板上表面,第2加样垫的一端设在第2胶体金垫的一端上,第2胶体金垫的另一端设在第2硝酸纤维膜的一端上,第2吸收垫的一端设在第2硝酸纤维膜的另一端上,特异性总抗体检测线和第2对照线依次设在第2硝酸纤维膜上;在特异性总抗体检测线处包被抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17和/或梅毒特异性抗原TPN47,在第2对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体,用切条机切成条状,得梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条的第2试剂条。以下给出免疫层析法检测患者的临床标本:参见图2,取稀释待检标本(全血、血清、血浆、脑脊液)120μL,加样于免疫层析检测条样品处(单孔加样),静置20min观察结果;或各取稀释待检标本(全血、血清、血浆、脑脊液)60μL,加样于免疫层析检测条样品处(双孔加样),静置20min观察结果。只在两条检测条对照区各有一紫红色条带出现,则判为阴性;在两试剂条A和B的检测区T及对照区C均有一紫红色条带出现,则判为阳性;加样检测后,检测区和对照区均不出现紫红色条带,为无效结果(参见图3)。其中,待检标本(全血、血清、血浆、脑脊液)稀释液采用生理盐水,稀释倍数0~50倍。以下给出试剂条性能检定:1)外观检查:白色包被反应膜平整、干净无污染斑点、无裂缝,胶带无开胶,无切斜现象。2)阳性标本符合率:用TP-IgG和梅毒特异性总抗体的不同滴度的阳性参比血清各50份采用梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条检定,计算阳性符合率。梅毒特异性总抗体的阳性参比血清采用采用TPPA(日本富士株式会社)法确定,TP-IgG抗体的阳性参比血清采用采用FTA-ABS(德国欧蒙公司)法确定。3)阴性标本符合率:用50份阴性参比血清检定,计算阳性符合率。梅毒特异性总抗体的阴性参比血清的确定采用TPPA(日本富士株式会社)法,TP-IgG抗体的阴性参比血清采用采用FTA-ABS(德国欧蒙公司)法确定。4)灵敏度检测:用卫生部室内质控血清检测,最低检出限度应小于或等于4NCU/mL,与TPPA(日本富士株式会社)相当。5)批内差异:同一批次梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条,用特征性血清检测,要求阳性血清检测结果显示色带的颜色深浅一致,阴性血清检测的结果阴性。6)批间差异:不同批次梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条,用特征性血清检测,要求阳性血清检测结果显示色带的颜色深浅一致,阴性血清检测的结果阴性。7)干扰试验:检测结果不受标本溶血(n=50)、脂血(n=50)和黄疸(n=50)的干扰。血清(或血浆)来自本申请人临床标本。8)交叉反应:采用梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条,进行系统性红斑狼疮(n=30)、类风湿病(n=30)、免疫性肝炎(n=30)等自身免疫系统疾病的检测,未发现交叉反应。自身免疫系统疾病的血清来自本申请人临床确诊患者。9)稳定性检测:应用Arrhenius法则,将梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条放置37°C20天后检测,以上各项指标无显著变化,确保成品在室温干燥条件下保存,有效期为18个月。以下给出具体实施例。实施例1:第1试剂条在硝酸纤维素膜(NC膜)IgG检测线上包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体,试剂条B的特异性总抗体检测线上包被抗人Ig单克隆抗体,在对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47抗体,室温晾干,密封室温保存备用。其中,抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体、抗人Ig单克隆抗体的浓度为1mg/mL,羊抗梅毒抗原(TPN17和TPN47)IgG抗体由抗TPN17-IgG抗体与抗TPN47-IgG抗体按体积比1∶1混合,其终浓度为1mg/mL;三者点样量为1μL/cm。将已纯化的金标记的梅毒重组抗原TPN17和TPN47以体积比1∶1混合后,均匀地涂于玻璃纤维纸上,在37°C烘干,制备成金胶体垫,密封备用。将固相化的纤维膜与胶体金结合的玻璃纤维、吸水纸等按一定顺序,通过PVC不干胶底板组合在一起,用切条机切成一定宽度试剂条。再用玻璃纤维纸1(参见图2)在加样垫处将第1试剂条和第2试剂条连接。或把纸条放入相应规格的朔料盒内,做成检测卡。把试剂条或检测试剂盒与干燥剂一起装入铝箔袋中,机器封口,密封保存。取1∶10稀释的待检标本血清120μL,加样于免疫层析检测条加样区,静置20min观察结果。只在试剂条对照区有一紫红色条带出现,则判为阴性;在检测区及对照区均有一紫红色条带出现,则判为阳性;加样检测后,检测区和对照区均不出现紫红色条带,为无效结果。(参见图3)实施例2:与实施例1相似,区别在于金胶体垫、梅毒特异性总抗体检测线仅由TPN17组成,不含有TPN47。结果判断与实施例1相同。实施例3:与实施例1相似,区别在于金胶体垫、梅毒特异性总抗体检测线仅由TPN47组成,不含有TPN17。结果判断与实施例1相同。实施例4:与实施例1相似,区别在于待检标本为脑脊液标本,结果判断与实施例1相同。实施例5:性能验证试验:按实施例1的方案制备梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条,然后进行性能验证。1)外观检查:白色包被反应膜平整、干净无污染斑点、无裂缝,胶带无开胶,试剂条宽度在3±0.1mm,无切斜现象。2)阳性标本符合率:50份经FTA-ABS(德国欧蒙公司)检测确定的TP-IgG阳性参比血清,采用梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条检出TP-IgG阳性50份,阳性标本符合率100%;而50份经梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA)(日本富士株式会社)检测确定的梅毒特异性总抗体阳性参比血清,采用梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条检出梅毒特异性抗体49份,阳性标本符合率98%。3)阴性标本符合率:50份经FTA-ABS(德国欧蒙公司)检测确定的TP-IgG阴性参比血清,采用梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条检出TP-IgG阴性50份,阴性标本符合率100%;而50份经梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA)(日本富士株式会社)检测确定的梅毒特异性总抗体阴性参比血清,采用梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条检出梅毒特异性抗体50份,阴性标本符合率100%。4)灵敏度检测:用卫生部室内质控血清(批号:200902001)检测,最低检出限度4NCU/mL。5)批内差异:同一批次梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条,用特征性阳性血清(高、中、低血清)检测,相同滴度检测结果显示色带的颜色深浅一致,阴性血清检测的结果阴性。6)批间差异:不同批次梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条,用特征性阳性血清(高、中、低血清)检测,相同滴度检测结果显示色带的颜色深浅一致,阴性血清检测的结果阴性。7)干扰试验:检测结果不受标本溶血(n=50)、脂血(n=50)和黄疸(n=50)的干扰。8)交叉反应:采用梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条,进行系统性红斑狼疮(n=30)、类风湿病(n=38)、免疫性肝炎(n=40)等自身免疫系统疾病的检测,未发现交叉反应。9)稳定性检测:将梅毒特异性IgG抗体与特异性总抗体联合检测试剂条放置37°C20天后检测,以上各项指标无显著变化。